低温条件下邻苯二甲醛对分枝杆菌杀灭效果的研究
发布时间：
2022-12-13
邻苯二 甲醛复配可制成邻 苯二 甲醛 消毒液 ，用 于医疗器械的高水平消毒。其较低浓度时杀菌效果 较好且 受 酸 碱度 影 响 较小 ，可直 接 使 用 ，无 需 活 化… ，并且挥 发性 小 ，使用 环境 中残 留浓度 较低 。 近年来 ，随着相关标 准规范 ’推 出，其应用逐渐扩 大 。国家相关标准 规定 ，其作用时间>15min。由 于大部分消毒剂的杀菌消毒效果都会受到温度的影 响 ，相关研究在 (20±1)cC条件下进行 。为观察 邻苯二 甲醛消毒液在 ≤20℃时的杀菌效果 ，分别选 择进 口和国产 2种邻苯二 甲醛消毒液市售产 品，以抗力较强的龟分枝杆菌为试验菌进行 了相关实验 ， 结果报告如下 。
1 材 料 与方 法 1．1 材料 消毒 液 A 为 国 产 某 产 品 ，标 识 有 效 含 量 为 5．0g／L～6．0g／L。经高效液相色谱法 测试 ，邻苯 二甲醛含量 5．6 L，pH值为 7．7O。消毒液 B为进 口某产品 ，标识 有效含量为 5．0g／L一6．0g／L。经 相同方 法测 试 ，含邻 苯 二 甲醛 5．7 L，pH 值 为 7．70。试 验 菌 中为 龟 分 枝 杆 菌 脓 肿 亚 种 (ATCC 19977)，由中国菌种保藏 中心提供 冻干管 ，于实验 室内 自制第 5、6代斜 面培养物备 用。中和剂为含0．3％卵磷脂 、3％ 吐温和 1％甘氨酸 的磷酸盐缓 冲 溶液 ，按《消毒技术规范》 要求鉴定合格。分枝杆 菌培养基为 MiddleBrook7H11琼脂 ，由国内某公司 生产 。配制时加入 0．5％甘油 ，灭菌后备用 。在温 度为 50℃ ～55℃时加入 10％无菌小牛血清 ，混匀 后使 用。THD 一0515低 温 恒 温 槽 ，温 度 范 围 为 一 5℃ ～100oC，温度波动度 (±0．05)℃。 1．2 方 法 1．2．1 菌悬液和菌片的制备 取培养 72h的新鲜 斜面 ，用 5ml灭菌 吸量管吸取 TSB营养 肉汤 ，将菌 苔从斜面通过吹吸 的方式洗下 ，随后吸出液体置 于 另一含有 6g～7g玻璃珠 的无菌离心试管 中 ，用 电动混合器进行混合至少 5min，再充分敲打振摇 ， 使细菌分散均匀 ，然后将菌液吸人到另一无 菌试管 内并用 TSB稀释至含菌量约为 1×10cfu／ml～5× 10cfu／ml的试验用菌悬液。取 20ul菌悬液 ，染 于 圆形不锈钢载体上(直径 10mm，厚度为 0．5mm)， 用取菌环将菌液在载体上涂匀后置于 37℃培养箱 中烘干后备用。 1．2．2 载体定量杀菌试验 按每个载体菌片 5ml 的用量 ，将邻苯二甲醛消毒液置于平皿 中，分别置于 5．0℃ 、10．0℃ 、15．0oC和 20．0 水浴恒温。将制 备好的菌 片浸于消 毒液 中，每个 温度均 分别 作 用 5．0min、10．0min、15．0min和 20．0min，达到要求 时间后 ，将菌片平移入 5m1中和剂 中，电动混合 器 振荡至少 5rain，中和时间 10min。振摇敲打试 管 ， 将载体上 的菌充分洗脱 ，取 洗脱液或稀释液进行接 种计数 ，计算杀灭对数值 。试验进行 3次 。 2 结果 两种 邻苯 二 甲醛消 毒剂 在 5．0℃、10．0℃ 、 15．0 和 20．0℃作用温度下 ，对分枝杆菌杀灭对 数值 >3．0的最短作用分别为 20．0min、15．0min、 10．0min和 5．0min3 讨 论 邻苯二 甲醛消毒剂应用历史较短，其材料相容 性 良好 ，对一般医疗器械如 内镜等医院常用器材均 无腐蚀性 ，不 良气味较小 ，有效使用浓度低。国内已 有很多相关性能研究 的文献报道 。。，均表明其对 细菌 、真菌和病 毒等有较好 的杀灭作用。同时也发 现影响邻苯二 甲醛杀 菌效果 的因素较多 ，其 中 pH 值影响较大 ，较 高的 pH值会 增强其杀菌效 果 。 本研究所用 2种产品均呈弱碱性。戊二醛消毒液 中 经多年使用 ，对其具有抗性 的分枝杆菌菌株已被分 离出¨引，而邻苯二 甲醛对分枝杆菌具有快速杀灭作 用 ，在中水平消毒时与戊二醛消毒液相 比具有一定 的优势¨ 引。尤其在软式 内镜的消毒方面 ，近年来 邻苯二 甲醛在大型医疗机构 中的应用 已较为广泛。 根据 2002年版《消毒技术规范》的要求 ，国内 消毒产 品的鉴定 均在 20℃条件下进行 ，有报道表 明，邻苯二 甲醛对芽孢 的杀灭效果会受到温度的影 响，提高作用温度会使杀菌能力增强 ，降低温度会减 弱其杀菌效果¨ 。本研究所 用消毒液均应 为原 液 使用 ，如果用悬液法 ，由于方法设计 的原 因，加入 的 菌液会使消毒液被稀释 ，其作用体系 中消毒液被稀 释 了 1．25倍 。不锈钢片载体更接近于内镜及其他 医疗器械的材质 ，有研究报道对邻苯二 甲醛杀菌效 果检测采用不锈钢片作为载体 j，本研究 同样以不 锈钢片为载体 ，采用载体定量 杀菌试验进行 了相关 检测。鉴于我国大部分地区冬 、夏季温差大 ，若冬季 消毒时室 内取暖设备不完备 ，消毒剂作用温度可能 <20oC。本研究在 <20℃条件下 检测两种邻 苯二 甲醛消毒剂杀菌效果 ，结果提示 ，要确保消毒效果需 适当延长作用时 间。实际应用 中，邻苯二 甲醛消毒 液一般会被连续使用 ，且最低有效浓度 为 0．3％ ，本 研究仅对一般市售消毒液原液进行低温杀菌效果检 测 ，对在使用过程 中其浓度降低后不 同低温下 的作 用时间 ，还有待于进一步研究。 参 考 文 献 [1] 常文 军，蔡 全才 ，徐荷 ，等．邻苯二 甲醛 消毒剂研究 进展 [J]． 中国消毒学杂 志 ，2004，21(1)：67—69． [2] 中华 人民共 和国卫 生部．医疗 机构消毒技术 规范[S]．2012． [3] 中华人 民共 和国国家卫生 和计划 生育委员会 ．软式 内镜 清洗 消毒 技术规 范 ：WS507—2016[s]．2016． [4] 张文福．医学消毒学[M]．北京 ：军 事医学科学 出版社 ，2002： 102—125． [5] 陈金龙 ，帖金风 ，王长德．两种仪器分析方法测定复方邻苯二甲 醛含量的比较研究[J]．中国消毒学杂志 ，2014，31(4)：396—397．
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